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分享一篇关于小鼠乳腺癌细胞的培养步骤

更新时间:2022-12-23      点击次数:331
  今天为大家分享一篇关于小鼠乳腺癌细胞的培养步骤,话不多说下面一起来了解一下吧。
 
  一.培养基及培养冻存条件准备:
 
  1)准备培养基,90%;上等胎牛血清,10%。
 
  2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
 
  3)冻存液:90%培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
  二.细胞处理:
 
  1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。**天换液并检查细胞密度。
 
  2)细胞传代:小鼠乳腺癌细胞如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
 
  对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
 
  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
 
  2.加2ml消化液于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
 
  3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
 
  4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
  3)细胞冻存:小鼠乳腺癌细胞待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
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